PRÁCTICA 7:DETERMINACIÓN DE DE HEMOGLOBINA EN SANGRE(19/01/15)

fundamento:
-Ésta técnica consiste en determinar la concentración de HB en sangre a partir de la absorbancia que nos determine el espectofotómetro.
-Se puede nrealizar de dos maneras distintas que vamos a explicar las dos:mediante metodo micro  y mediante realización de gráfica , obteniendo la recta de la relación de la absorbancia con la concentración de hemoglobina.

-Vamos a explicar primero la técnica en método realizado en clase el dia 19/01/15.

PRÁCTICA EN MÉTODO MICRO:
material:
-gradilla
-3 tubos de hemólisis y que sean medianos(ni pequeños,ni grandes)
-pipeta graduada
-micropipeta
-agitador magnético


reactivo:
-reactivo de Drabkin.(color amarillo preparado en clase) y CAL.
muestra:
-sangre anticoagulada con heparina o EDTA.
Técnica:
1.Se prepara 2 tubos de con sangre diferente y se apunta:ejempla S1 Y S2.Porque lo hemos hecho con dos mestras diferentes con distinta sangre cada una.
2.Se preparan en 3 tubos :el blanco,el patrón y la muestra(señalizando con rotulador los tubos)ejemplo: BL,PA y MU.
3.Para preparar el tubo blanco hemos añadido 2,5ml de reactivo sólamente.
Para preparar el tubo patrón hemos añadido 2,5ml de reactivo y 10 microlitros de calibrador.
Para preparar el tubo muestra hemos añadido 2,5 de reactivo y 10 microlitros de sangre.
4.Los tapamos con papel parafilm,los agitamos con el agitador magnético y dejamos incubar 10 minutos.

5.Se introducen éstos 3 tubos en el espectofotómetro  y pulsamos el botón rojo que pone PUMP y el aparato nos dá el valor de la absorbancia de cada uno.En éste caso nos ha dado( A) 0,133 el patron ,(A) 0,177 la muestra 1 y (A)0,114 la muestra 2 y éstos valores nos sirven como referencia para realizar la gráfica también.
resultado:
muestra 1:                                    muestra 2:
    0,177                                           0,014
_________  x15 = 20,81g/d        _______ x15=12,297g/dl
     0,133                                         0,133

interpretación:   La muestra 1 nos a dado un valor alto ,por encima del valor normal. La muestra 2 nos ha dado un índice normal de concentración de hemoglobina en una mujer.


                                                     REALIZAMOS LA GRÁFICA: