Para detectar qué TIPOS de hemoglobina hay en sangre.
material:
-tiras de cellogel
-aplicador de electroforesis semicírclo
-rodillo
-bandeja
-cubetas de plástico
-fuente de alimentación
-placa de vidrio
-centrifugadora
-pipeta de 5ml
fotografías de material preparado por profesores:
reactivos:
-pipeta de 5ml
fotografías de material preparado por profesores:
reactivos:
-agua destilada
-suero fisiológico
-ácido acético 5%(solución decolorante)
-metanol,ciclohexanona, ac.acético glacial(solución transparentadora)
-cloroformo
-metanol
-tampón ph 8.8
-Negro amido(coloranre)
técnica:
-PRIMERA PARTE DE LA TÉCNICA
-PRIMERA PARTE DE LA TÉCNICA
-Preparación de hemolizado:
1.Preparamos 3ml de sangre.
2.Lo centrifugamos a 3000 rpm unos 10 minutos.
3Retiramos el sobrenadante con una pipeta pasteur de cristal y le echamos 4-5 ml de suero salino.
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4Homogeneizamos bien con pipeta pasteur que hemos comprobado que da mejor resultado que con un agitador magnético.
5.Lo introducimos de nuevo a la centrifugadora 5 min (en clase hemos centrifugado 10 minutos porque con 5 se quedaba el proceso sin terminar).
6.Volvemos a repetir este paso de lavado unas 3 veces consecutivas.
7.Se repite la operación pero ésta vez lo hemolizamos con cloroformo y agua destilada(medimos el volumen de hematíes y se le añade media parte de cloroformo,que lo introducimos en la cámara de seguridad y parte y media de agua destilada.
Ejemplo:si de hematíes hay un volumen de 1ml,echamos 0,5 de cloroformo y 1,5 ml de agua destilada.
-2ª PARTE DE LA TÉCNICA:
-1 intoducimos tiras cellogel en cubeta boca arriba en tampon durante 10 min que se empapen bien.
-2 colocamos las tiras en el puente, lo introducimos en cubeta y colocamos nuestra muestra en la tira,haciendo una fina raya de sangre. Le aplicamos la fuente de alimentación a 400v durante 15 min.(porque con 10min no nos a salido bien).
-3colocamos las tiras boca abajo en:
-bandeja con negro amido 10 min(tinción)
-bandejacon ác.acético 5% 10 min(decoloración)se repite 3 veces.
-bandeja con metanol 1 min(deshidratación)
-bandeja con solución transparentadora 2-3 min(transparentación).
3.Después se colocan las tiras en una placa de vidrio y las alisamos con un rodillo,con la parte absorbente boca abajo.
4.Metemos en la estufa unos 60-70ºC unos 5-6 min hasta que las tiras queden transparentes del todo.
resultados:
-hemoglobina A.
Ejemplo:si de hematíes hay un volumen de 1ml,echamos 0,5 de cloroformo y 1,5 ml de agua destilada.
-2ª PARTE DE LA TÉCNICA:
-1 intoducimos tiras cellogel en cubeta boca arriba en tampon durante 10 min que se empapen bien.
-2 colocamos las tiras en el puente, lo introducimos en cubeta y colocamos nuestra muestra en la tira,haciendo una fina raya de sangre. Le aplicamos la fuente de alimentación a 400v durante 15 min.(porque con 10min no nos a salido bien).
-3colocamos las tiras boca abajo en:
-bandeja con negro amido 10 min(tinción)
-bandejacon ác.acético 5% 10 min(decoloración)se repite 3 veces.
-bandeja con metanol 1 min(deshidratación)
-bandeja con solución transparentadora 2-3 min(transparentación).
3.Después se colocan las tiras en una placa de vidrio y las alisamos con un rodillo,con la parte absorbente boca abajo.
4.Metemos en la estufa unos 60-70ºC unos 5-6 min hasta que las tiras queden transparentes del todo.
resultados:
-hemoglobina A.
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